Atualmente muitas políticas governamentais levam esforços para o desenvolvimento de tecnologias para que seja possível obter o biodiesel. Essa produção gera como coproduto glicerina, que representa cerca de 10% do volume total. O método mais utilizado nas indústrias é a glicerólise química, porém a glicerólise enzimática é uma alternativa ambientalmente mais correta para a utilização de glicerina na produção de monoacilgliceróis (MAG) e diacilgliceróis (DAG) a partir de óleos vegetais. Neste estudo foram realizados 16 ensaios de glicerólise enzimática dos óleos de canola, girassol e tabaco, com variação na quantidade de glicerol, lipase, tempo e temperatura em cada ensaio. Os produtos das reações foram avaliados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC) e Espectroscopia de Infravermelho (IV). Com o óleo de girassol, se obteve um porcentual de conversão de cerca de 40% de triacilglicerol (TAG) em MAG e DAG. Com óleo de canola e de tabaco a conversão foi menor. Foi verificado que a quantidade de lipase é um fator que influencia diretamente a reação de glicerólise, proporcionando o desenvolvimento de um método mais limpo que reduz os impactos ambientais do procedimento químico tradicional.