Introducción: El aislamiento de T. gondii a partir de líquido cefalorraquídeo permite el diagnóstico confirmatorio de toxoplasmosis cerebral, considerada la segunda infección oportunista más importante en pacientes VIH positivos. Objetivo: Aislar Toxoplasma gondii a partir de muestras de líquido cefalorraquídeo de dos pacientes VIH positivos con toxoplasmosis cerebral. Materiales y métodos: Se realizó la inoculación intraperitoneal del sedimento de LCR de dos pacientes VIH positivos con toxoplasmosis cerebral en ratones ICR, se llevaron a cabo 5 pases sucesivos ciegos hasta la observación de taquizoítos de T. gondii en el exudado peritoneal mediante examen directo y coloración de extendidos con Romanowsky modificado. Resultados: A los 43 días los 4 ratones de trabajo presentaron piloerección, hepato-esplenomegalia, letargia y en el exudado peritoneal se observaron taquizoítos de T. gondii , hallazgo que fue confirmado al examinar los extendidos coloreados con Romanowsky modificado. Estos aislamientos fueron crioconservados y fue confirmada la viabilidad poscongelamiento de los mismos. Conclusiones: A pesar de que las técnicas de detección directa de T. gondii en LCR tienen una baja sensibilidad (38%) el presente trabajo permitió obtener dos aislamientos de T. gondii de dos pacientes VIH positivos con toxoplasmosis cerebral.